환경
머무름 변화
머무름 손실
C18 컬럼
답변
원인은 다양합니다. "추가 정보" 섹션을 참조하십시오.

추가 정보
머무름 손실의 원인은 여러가지가 있습니다. 다음은 머무름이 예상보다 낮은 일반적인 이유 중 일부입니다.

이온 쌍 시약을 이용한 컬럼 컨디셔닝이 충분하지 않습니다.
Method에서 hexane sulfonic acid와 같은 이온 쌍 시약을 사용하는 경우, 적절한 양의 이온 쌍 시약으로 컬럼을 포화시키기 위해서는 종종 최대 200 컬럼 부피의 컨디셔닝이 필요할 수 있습니다.
컬럼이 충분히 긴 시간동안 컨디셔닝되지 않은 경우, 컬럼이 완전히 컨디셔닝될 때까지 머무름 시간이 감소합니다.
PIC Reagents Care & Use Manual("PIC 시약 관리 및 사용 설명서")을 참조하십시오.
컬럼 재평형화가 불충분합니다(Gradient Method의 경우).
각 그레디언트 테이블의 끝에서 C18 컬럼의 5-10배 되는 부피로 재평형화하는 것이 좋습니다.
재평형 상태가 부적절하면 다음 주입 전에 컬럼에 과량의 유기물이 남아있을 수 있으며, 이로 인해 가장 빠르게 용리되는 피크의 머무름 시간이 단축될 수 있습니다.
새 컬럼은 더 큰 재평형 부피(예: 10 컬럼 부피)를 필요로 하며, 구형 컬럼은 더 적은 재평형 부피(예: 5 컬럼 부피만)를 필요로 할 수 있습니다.
구형 컬럼은 C18 리간드가 손실되었을 가능성이 있습니다(아래의 "C18 Ligand의 가수 분해" 참조).
입자 표면의 극성이 조금 높아져 과도한 유기 용매가 컬럼에서 쉽게 흘러 나옵니다.
이는 pore의 소수성을 약화시키기 때문에, 수용성이 더 강한 이동상이 더 쉽게 pore에 유입되게 합니다.
새 컬럼에는 C18 리간드가 더 많습니다.
입자 표면은 소수성이 좀 더 강합니다.
이로 인해 잔류 유기 용매를 제거하고 수용성이 강한 이동상을 주입하는 것이 더 어려워집니다.
따라서 기존 Method 일지라도 새로운 컬럼에는 재평형화를 더 오래 실행해야 할 수 있습니다.
재평형화 부피를 10 컬럼 부피로 늘리면 예상 머무름 시간을 얻는 데 도움이 될 수 있습니다.
100% 수용성 용액을 사용하도록 설계되지 않은 C18 컬럼의 pore dewetting(hydrophobic collapse):
95% 이상의 물을 사용해야 하는 Method의 경우, 흐름을 끄고 나중에 흐름을 다시 시작할 때 머무름 손실이 나타날 수 있습니다.
머무름 시간은 주입할 때마다 조금씩 줄어들 수 있습니다.
위의 두 경우 모두, pore 내부는 소수성이 매우 강하기 때문에 pore에서 물이 배출됩니다.
수용성이 강한 용매에 사용하도록 설계되지 않은 기존 C18 컬럼의 경우 유기 성분이 5% 이상인 용매를 사용하는 것이 좋습니다.
100% Aqueous Pore Dewetting Test Using Atlantis T3 Columns(Atlantis T3 컬럼을 사용한 100% Aqueous Pore Dewetting 테스트)를 참조하십시오.
C18 리간드 가수 분해(리간드 손실):
C18 컬럼이 노화됨에 따라 C18 리간드가 가수 분해되고 입자로부터 분리될 수 있습니다.
따라서 머무름 시간이 줄어듭니다.
컬럼 히터가 너무 뜨겁습니다.
컬럼 히터가 제대로 작동하지 않으면 예상보다 뜨거울 수 있습니다.
온도가 높을수록 분석 물질이 예상보다 빨리 용리될 수 있습니다.
외부 온도계를 사용하여 컬럼 히터의 실제 온도를 측정합니다.
유속이 너무 빠름 :
시스템 체크 밸브나 펌프가 제대로 작동하지 않을 경우 유속이 예상보다 빠를 수 있습니다.
유속이 빠르면 분석 물질이 예상보다 빨리 용리됩니다.
실행 중, 일정 기간 동안 폐기물을 눈금 실린더로 수집합니다. 수집된 부피가 예상 부피인지 확인합니다.
Gradient Proportioning Valve (GPV)가 제대로 작동하지 않음:
Gradient Proportioning Valve (GPV)로 인해 유기물질의 전달량이 늘고 수용성 물질의 전달량이 줄어들 수 있습니다.
이 두 경우 모두 머무름 손실을 일으킬 수 있습니다.
이동상 pH가 올바르지 않음:
이온화 가능한 화합물 머무름은 이동상의 pH가 올바르지 않은 경우 변경될 수 있습니다.
이온화 가능한 화합물 머무름은 또한 이동상의 pH가 시간에 따라 점차적으로 변화하는 경우 변경될 수 있습니다.
약산의 경우, pH가 2 pH에 해당하는 pKa보다 높으면 분석 물질이 하전되고 일반적으로 극성이 더 높습니다(머무름이 적음).
약염기의 경우, pH가 2 pH에 해당하는 pKb보다 낮으면 분석 물질이 하전되고 일반적으로 극성이 더 높습니다(머무름이 적음).
잘못된 사전 혼합 이동상 조성:
사전 혼합 이동상이 너무 많은 유기 용매(또는 너무 적은 수용성 용매)를 함유하게 되면 머무름 시간이 예상보다 줄어 듭니다.